簡介
樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃(6個月內檢測),避免反復凍融,標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
試劑盒中取出標準品,準備7個試管,先從10ng/mL標準品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至500pg/mL(例:50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的500pg/mL濃度標準品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將500pg/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標準品,依次為: 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL、 7.82pg/mL,從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標準品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標準品(0pg/mL)。

使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當日配置當日使用。
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
備 注:如待測樣本中IL-1h濃度高于標準品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù)。
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
標準品濃度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
7.82 |
0 |
OD值 |
2.406 |
1.757 |
1.041 |
0.613 |
0.547 |
0.251 |
0.145 |
0.074 |
校正OD值 |
2.332 |
1.683 |
0.967 |
0.539 |
0.473 |
0.177 |
0.071 |
0 |
下圖所示標準曲線僅供示例,結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果
重復性
使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。