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產(chǎn)品中心

  • 大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1(GRIA1)試劑盒

    規(guī)格:
    價格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW6612
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:90
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大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1(GRIA1)試劑盒

使用本產(chǎn)品之前,必須完整閱讀本說明書,僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。

簡介
AMPA離子能谷氨酸受體1(AMPA-selective glutamate receptor 1)是一種離子型谷氨酸受體,其基因編碼為GRIA1,蛋白質(zhì)ID為P42261,AMPARs(AMPA型離子型谷氨酸受體)是四聚體配體門控離子通道,在突觸傳遞和可塑性中發(fā)揮關(guān)鍵作,AMPARs由四種亞基(GluR1、GluR2、GluR3、GluR4)組成,這些亞基的不同組合賦予受體不同的功能特性。

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù) : 將捕獲抗體包被于酶標板上,捕獲樣品及標準品中的待測物GRIA1,清洗后,再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣本中GRIA1的濃度。

需要的其他材料

1.  酶標儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
2.  移液器及槍頭;
3.  蒸餾水或去離子水;
4. 100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機;
6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;

7.  用于稀釋標準品和樣品的試管。

樣品保存

樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

試劑準備工作

使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。

洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)

標準品配置

試劑盒中取出標準品,準備7個試管,先從400ng/mL標準品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至20ng/mL(例:50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的20ng/mL濃度標準品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將20ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標準品,依次為: 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、

1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標準品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。




抗體工作液配置

使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當日配置當日使用。

酶結(jié)合物工作液配置

使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。

備 注:如待測樣本中GRIA1濃度高于標準品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計算
計算標準品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。
若樣品OD值高于標準曲線上限,應(yīng)適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。

標準品濃度(ng/mL)

20

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0

OD值

2.510

1.767

1.042

0.636

0.454

0.253

0.166

0.064

校正OD值

2.446

1.703

0.978

0.572

0.39

0.189

0.102

0



本圖所示標準曲線僅供示例,結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結(jié)果

重復(fù)性

板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。

靈敏度

經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為0.16ng/mL。

特異性
該試劑盒測定可識別重組大鼠GRIA1。

其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。